在生物医学研究中,一抗和二抗的种属来源通常保持一致。选择二抗时,应根据一抗的种属来挑选匹配的二抗。例如,若一抗是小鼠源的单克隆抗体,那么选择的二抗应为抗小鼠的二抗,如山羊抗小鼠或兔抗小鼠。
一抗与二抗的定义及其作用
一抗(primary antibody)是指能够特异性结合特定蛋白的免疫球蛋白,用于纯化、检测和定量特定的生物标志物。一抗可分为多克隆抗体(pAb)和单克隆抗体(mAb),分别由多个B细胞克隆或单一B淋巴细胞所产生。
二抗(secondary antibody)则是与靶抗原结合的一抗的延伸,通常用于标记和检测一抗,以实现信号放大和可视化。一抗可以是完整的抗体或其片段,如IgG分子、Fab片段及F(ab’)2片段。
选择二抗时需考虑的因素
在选择二抗时,应重点考虑以下几点:
一抗的种属来源
二抗应与所用一抗的物种来源一致。例如,若一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗则应选用抗小鼠的二抗,如山羊抗小鼠或兔抗小鼠。
一抗的类别和亚类
二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。多克隆抗体一般为IgG类免疫球蛋白,故相应的二抗为抗IgG抗体;而单克隆抗体则因不同的亚型而可能需要特定的二抗,根据一抗的类型或亚类选取。
实验类型
不同的实验设置可能要求使用不同类型的二抗。例如,在双标实验中,如果两种一抗来自不同物种,二抗则应选择来自第三种物种的抗体,以避免交叉反应。
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